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细胞培养的血清选择

来源: | 发布日期:2023-04-03 | 浏览量:1

哺乳动物细胞培养是一个至关重要的工具,通常是细胞生物学家研究工作流程中的初始阶段。 无论是科学家自己进行培养还是依靠共享资源实验室,几十年来,细胞培养的基本面基本面一直保持不变。 细胞在合成培养基中生长,该培养基可为细胞提供其营养需求。 这些要求至少是氨基酸,维生素,盐和葡萄糖等能源等组件。 但是,为了支持生长,细胞需要动物血清或其等效物。 血清具有1,000多种不同的成分,包括蛋白质,脂质,碳水化合物,生长因子,酶和其他仍然不确定的成分。 血清具有调节细胞渗透性的功能,并充当进入细胞的营养和其他分子的载体。 尽管可以使用有效的无血清培养基,但含有动物血清的培养基用于生命科学中的大多数细胞培养应用。 在这里,我们讨论为研究选择血清时要考虑的关键因素,以确保您获得准确,一致的结果。


血清的成分

动物血清是细胞培养培养基中的标准成分,但血清本身只是标准或一致的。

血清从批量到批量差异很大,“均匀”细胞群可能对这些变化极为敏感。 从一个实验到下一个实验使用的大量血清之间的差异会影响研究结果。 诸如激素,尿酸,尿素,胆红素,肌酸和胆固醇之类的成分都是高度变化的,对细胞的后果(例如生长速率变化或不需要分化)的后果。

选择从样品开始

在为细胞文化项目选择血清时,该过程中最重要的部分是测试多个批次,并在整个项目中选择一个要使用的批次,包括其他机构的任何合作者可以汇总或比较其结果。

艾莉森·基利亚(Alison Killilea)负责加州大学伯克利分校的细胞培养设施。 她说,该设施每年都要求四个不同供应商的样品。 “我们测试了这些血清的三到四个不同细胞系的生长,确保我们选择一条主要的细胞系,转化的细胞系和293T细胞,这是通常用于转染实验的系。” 不同的胎牛血清(FBS)通过生长三个不同的细胞系来测试三个星期,以确定当所有血清都以相同的密度铺路时,哪种血清会产生最一致的细胞数量。

除了确定所测试的特定细胞最有反应的血清外,重要的是要从整个项目中购买足够的血清。 对于大型研究小组,这可能是一个挑战。 


一些制造商提供了匹配的服务,因此可以购买具有相似性能和属性的新批次以更换以前的批次。

质量高度可变

制造过程中的许多因素有助于血清产品的质量。 总部位于以色列的生物行业科学事务副总裁戴维·菲奥伦蒂尼(David Fiorentini)表示,他的公司进行了广泛的质量控制测试,并根据原籍国区分了其血清。 “在以色列的主要设施中过滤的所有FBS均由欧洲药品质量(EDQM)的局认证。 所有血清均在CGMP符合CGMP的设施中进行处理。

生物产业以多种方式监视血清的质量。 公司仅从批准的供应商那里购买原材料,并遵守这些材料的书面规格。 血清在干净的房间中加工。 每个生产地块都是完全可追溯的,QC测试了物理,化学和生物学性能以及不育和不定期试验测试。

在MTI Globalstem,QC过程的重要部分是在研究人员使用的各种不同细胞类型上测试血清批次。 “对于我们的干细胞客户来说,这确实是拥有可以养活细胞并使其在文化中增长而不会区分的血清的重点,” MTI Globalstem营销总监Donna Trollinger说。

研究人员还应注意血清的原籍国,并确保血清验证是否没有分枝杆菌和病毒。 原籍国很重要,因为每个国家都有自己的监管机构,批准其他血清原籍国。 例如,一些原籍国已获得欧盟的批准,但未获得美国农业部的批准。

加工

血清可以通过热灭活,伽马射线,透析和其他方法来处理其特定应用的特性。 加热血清量是一种常见的过程,用于灭活化补体的蛋白质,这些蛋白质会干扰测定。 但是,热处理也可能使系统的其他未定义组件失活,因此,除非需要您的特定应用,否则避免热灭活的血清是一个好主意。

“热灭活始于1970年代,直到现代过滤系统使其过时。 但是有些人仍然使用这些旧方案并在不知不觉中影响细胞生长速度,因为灭火会破坏生长因素。”

伽玛辐照是血清中使用的另一种常见治疗方法。 伽玛照射的主要目的是使病毒失活。 透析一些FBS以去除低分子量成分,或通过色谱处理以去除IgG。

在为细胞培养应用选择血清时,研究人员的任务具有挑战性。 有许多因素需要考虑,以及对各种制造商和批次的样品进行劳动密集型测试。 此外,他们必须考虑针对其应用,原产国和成本的特殊处理需求。 Thermo Fisher Scientific的全球研究血清全球营销发展经理Chris Scanlon说,研究人员在为研究选择血清时倾向于被误导,“当还有许多其他元素更好的元素时,他们过于重视起源作为质量标记 定义血清质量(即生长,克隆,电镀)。 他还建议利用其FBS专家团队直接与客户合作,以找到合适的血清以满足他们的研究和预算需求。”

最后,选择适当的血清以在细胞培养实验中使用,需要对各种样品进行动手测试,以查看细胞的反应。 它还需要对文献进行一些扫描才能了解生长细胞类型的最佳条件(尤其是如果细胞系对您来说是新的),并确定细胞是否需要特定的血清类型或变异。 最后,预期使用的计划可能是至关重要的,尤其是在进行大规模或长期实验的情况下。



【本文标签】 细胞培养 培养基

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