细胞收集方法如何选择？

经常做细胞实验的你，想必一定遇到过这个难题：细胞收集，究竟哪种方案最合适？

离心收集or瓶内裂解or胰酶消化？今天，跟着小岳一起来了解一下细胞收集方法的优劣对比及操作步骤!

1、离心法

优点：离心法操作方便，同时我们可根据收集到的细胞沉淀来加入适量的裂解液，从而能够控制样品蛋白的浓度。

缺点：在离心过程中却容易造成细胞破碎而降低总蛋白得率，同时会造成细胞外基质（ECM）的丢失，从而造成样品蛋白质图谱的不完整。

（注：细胞外基质（ECM）是由细胞外大分子和矿物质（如胶原蛋白、酶、糖蛋白和羟基磷灰石）组成的三维网络，为周围细胞提供结构和生化支持。因为多细胞在不同的多细胞谱系中独立进化，细胞外基质的组成因多细胞结构而异；然而，细胞粘附、细胞间通讯和分化是ECM的常见功能。细胞外基质主要由5类物质组成，即胶原蛋白、非胶原蛋白、弹性蛋白、蛋白聚糖与氨基聚糖，按分布部位划分主要分为基底膜（Basement membrane）和间质基质(Interstitial matrix)）

2、瓶内裂解法

优点：瓶内裂解法最大的优点是可以有效的防止细胞在离心过程中破碎，能有效的提高总蛋白得率，同时也能完整的保留细胞外基质（ECM）。

缺点：操作会相对复杂，且不易控制加入的裂解液量，往往会造成总蛋白浓度低且粘度高等情况；对于一些药物处理的细胞和贴壁不牢的细胞，使用此方法在清洗阶段也容易造成细胞大量丢失。

3、胰酶消化法

优点：胰酶处理的细胞个体形态单一，不聚团，对细胞损伤小。

缺点：会造成细胞外基质（ECM）的完全丢失，同时会剪切一些对胰酶敏感的蛋白。

对于WB蛋白样品中是否含有对胰酶敏感的蛋白，我们往往不太确定，同时胰蛋白酶也属于外来蛋白质，如果不能做到彻底清除，同样会污染我们的样本。所以用于WB的细胞样品不建议使用胰酶消化法收集细胞。

每一种方法都有自己的优势和局限性，我们要根据自己的细胞类型选择合适的细胞收集方式。

离心法：适用于悬浮细胞、贴壁不牢和药物处理过的细胞；

瓶内裂解法：适用于所有的贴壁细胞；

胰酶消化法：适用于目的蛋白非细胞外基质（ECM）或对胰酶不敏感的蛋白。

在一般情况下，根据经验会首推瓶内裂解法，其次离心法；不推荐胰酶消化法。