细胞污染的清除与预防

污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。

一、污染的清除

培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之。有细胞株留存的或可购置的，可在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。若污染细胞价值较大，又难干重新得到，可采取以下办法清除。

1.使用抗生素

抗生素对杀灭细菌较有效，联合用药比单独用药效果好，预防用药比污染后再用药效果好。

预防用药一般用双抗牛素(青霉素100u/ml加链霉素100ug/mL)，污染后清除用药需采用大于常用量5~10倍的冲洗法，于加药后作用24~48小时，再换常规培养液。此法在污染早期可能有效。

所用抗生素品种除青霉素、链霉素外，还可用庆大霉素、卡那霉素、多粘菌素、四环素、制霉菌素等。常用400~800ua/ml卡那霉素或200ua/ml四环素外理，每隔2~3日换液1次，传1~2代进行治疗。

2.加温处理

将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。所以在处理前要进行预试验，摸索能最大限度杀死支原体又对细胞影响最小的加热时间。此法有时不可靠。若先用药物处理后，再以41℃加温处理效果更佳。

3.使用支原体特异性血清

用5%的兔支原体免疫血清(血凝效价1:320以上)可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。但此法比较麻烦，不如用抗生素方便、经济

4.其他方法

除了上述去除污染的方法外，还有动物体内接种除菌法、巨噬细胞吞噬法、污染培养瓶中加溴尿嘧啶再用光照射的方法及过滤法等，但均较麻烦，目效果不确定。所以一日支原体污染，除非有特别重要价值，一般均弃之重新培养。

二、污染的预防

预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。一般预防可从以下几方面着手。

1.从物品、用品消毒灭菌着手

细胞培养所用物品清洗，消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。

2.从操作者做起

(1)操作者责任心要强，要细心稳重，操作技术要熟练。

进无菌室前要用肥皂洗手或用5%新洁尔灭浸泡5分钟，按规定穿隔离衣。进入后关好门，坐下来尽量少走动。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。

事先要严格检查器材、溶液和培养物，不要把污染品或未经消毒的物品带入无菌室内，更不能随便使用，以免造成大批污染。

(2)操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。